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Colunas e resinas cromatográficas A separação na cromatografia de troca iônica (IEX) baseia-se na seletividade através da adsorção reversível de moléculas com carga com um grupo imobilizado de carga oposta. Um trocador iônico consiste em uma matriz porosa insolúvel carregada com grupos covalentemente ligados. IEX é a técnica frequentemente utilizada para a purificação de substâncias biológicas. Biomoléculas com pequenas diferenças de carga em sua superfície podem ser separadas utilizando IEX. Com esta técnica, alta capacidade de ligação e alta resolução podem ser obtidas com a escolha do trocador iônico correto e condições de separação otimizadas. Os grupos Q, S e SP são trocadores iônicos fortes que mantém a capacidade de carga em uma ampla faixa de pH. Outros grupos como CM e DEAE são os trocadores fracos e sua capacidade de carga varia com o pH. A cromatografia de exclusão molecular (SEC) separa as biomoléculas baseando- se na diferença de tamanho molecular. A amostra é eluida de forma isocrática – utilizando um único tampão e sem necessidade de gradiente. A composição do tampão geralmente não afeta a resolução, assim, as condições do tampão podem variar para se adequar ao tipo de amostra ou requisitos para a próxima etapa de purificação, análise ou armazenamento. No final, as proteínas são coletadas na forma purificada e no tampão escolhido. A cromatografia de exclusão molecular pode ser aplicada de duas formas: separação de grupo e separação de alta resolução. Troca Iônica (IEX) Exclusão molecular (SEC) A cromatografia de interação hidrofóbica (HIC) separa proteínas com diferenças na hidrofobicidade. A separação é baseada na interação reversível entre uma proteína e a superfície hidrofóbica do meio cromatográfico. Essa interação é aumentada pela alta força iônica do tampão, que faz da HIC o próximo passo para a purificação de proteínas que foram precipitadas com sulfato de amônio ou eluídas em alta concentração de sal durante a IEX. As amostras em solução de alta força iônica se ligam à resina e para eluir, as condições são alteradas. A eluição é realizada geralmente por reduções na concentração de sal sendo feita através da formação de steps ou com um gradiente decrescente. Interação hidrofóbica (HIC) PURIFICAÇÃO DE PROTEÍNAS Baixe o App Purify para seleção de colunas 25