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Columnas y resinas cromatográficas La separación en la cromatografía de intercambio iónico (IEX) se basa en la selectividad a través de la adsorción reversible de moléculas cargadas con un grupo inmovilizado de carga opuesta. Un intercambiador iónico consiste en una matriz porosa insoluble cargada con grupos unidos covalentemente. IEX es la técnica utilizada a menudo para la purificación de sustancias biológicas. Las biomoléculas con pequeñas diferencias de carga en su superficie se pueden separar con IEX. Con esta técnica, se puede lograr una alta capacidad de unión y una alta resolución eligiendo el intercambiador de iones correcto y las condiciones de separación optimizadas. Los grupos Q, S y SP son fuertes intercambiadores de iones que mantienen la capacidad de carga en un amplio rango de pH. Otros grupos como CM y DEAE son intercambiadores débiles y su capacidad de carga varía con el pH. La cromatografía de exclusión molecular (SEC) separa las biomoléculas en función de la diferencia en el tamaño molecular. La muestra se eluye de forma isocrática, utilizando un único tampón y sin la necesidad de un gradiente. La composición del buffer generalmente no afecta la resolución, por lo tanto, la condición del buffer puede variar según el tipo de muestra o los requisitos para el siguiente paso de purificación, análisis o almacenamiento. Al final, las proteínas se recogen en la forma purificada y en el tampón elegido. La cromatografía de exclusión molecular se puede aplicar de dos maneras: separación de grupos y separación de alta resolución. Intercambio Iónico (IEX) Exclusión molecular (SEC) La cromatografía de interacción hidrofóbica (HIC) separa las proteínas con diferencias en hidrofobicidad. La separación se basa en la interacción reversible entre una proteína y la superficie hidrófoba del medio cromatográfico. Esta interacción se ve reforzada por la alta fuerza iónica del tampón, que hace que HIC sea el siguiente paso para la purificación de proteínas que se precipitaron con sulfato de amonio o se eluyeron en una alta concentración de sal durante IEX. Las muestras en solución de alta fuerza iónica se unen a la resina y para eluir, las condiciones cambian. La elución se lleva a cabo generalmente mediante reducciones en la concentración de sal que se realiza mediante la formación de pasos o con un gradiente decreciente. Interacción hidrofóbica (HIC) PURIFICACIÓN DE PROTEÍNAS Descargue la app Purify para seleccionar columnas 25